Virus del sarampión, rubéola y paperas CNR

Los Centros Nacionales de Referencia ( CNR ) son laboratorios expertos en microbiología de enfermedades transmisibles . Son nombrados por orden del Ministerio competente en materia de sanidad por un período de 4 años. Comité de la CNR bajo la responsabilidad del Director General del Instituto de Vigilancia de la Salud.

Es responsable, en estrecha colaboración con Public Health France (SpF), de contribuir al diagnóstico y la vigilancia epidemiológica de las infecciones humanas causadas por el virus del sarampión (virus del sarampión, MeV, virus del sarampión), virus sincitial respiratorio humano (hRSV, RSV ) , metapneumovirus humano (hMPV), los 4 virus de la parainfluenza humana (hPIV) y el virus de las paperas (MuV, parotiditis).

El diagnóstico virológico del sarampión generalmente acompaña al proceso de “DO” (Notificación Obligatoria de Sarampión). Se basa en el diagnóstico directo: prueba del virus o de sus constituyentes (ARN, antígenos), o en la prueba de anticuerpos: diagnóstico indirecto o serodiagnóstico.

Retiros :

• La muestra de saliva es tomada por el médico mediante un kit de saliva proporcionado por la ARS , que comprende los sistemas de muestreo (“salivette”), transporte (caja y sobre) e información (identidad clínica). La muestra permite la búsqueda del genoma del ARN viral y de los anticuerpos antivirus en caso de ARN negativo. Se envía por correo al CNR .
• En un entorno hospitalario, se recomienda una muestra nasal o nasofaríngea en medio de transporte virológico. Permite buscar ARN viral.
• La muestra de sangre suele estar destinada a la búsqueda de anticuerpos contra el virus del sarampión (serología). Este es el abordaje recomendado en la medicina comunitaria hoy en día (Cf. Hoja de recomendaciones). La muestra de sangre periférica se toma de un tubo seco. No es necesario si se ha tomado una muestra de saliva. La presencia del virus en la sangre (viremia) se puede probar en un tubo de sangre con EDTA.
• En determinadas complicaciones son útiles otras muestras: secreciones traqueobronquiales, orina, líquido cefalorraquídeo, etc.

Las tecnicas:

• La técnica básica utilizada para la detección del virus es la búsqueda del ARN viral mediante una técnica molecular: RT- PCR (reversa-transcripción, reacción en cadena de la polimerasa) en tiempo real. En caso de detección positiva, la identificación del genotipo viral se realiza mediante la secuenciación de parte del genoma viral.
• El aislamiento de las cepas del virus del sarampión se realiza en el CNR en cultivos de células Vero Slam. Está indicado para el estudio de ciertas cepas virales.
• La detección de anticuerpos contra el virus del sarampión, de las clases IgG e IgM, se realiza de forma rutinaria mediante kits inmunoenzimáticos (ELISA) comerciales. La búsqueda de anticuerpos neutralizantes en cultivo celular (anticuerpos protectores) es posible, pero más complicada. A partir de cierto nivel, se correlacionan con los niveles de anticuerpos detectados en ELISA.

Tiempos de respuesta, interpretación y transmisión de resultados:

• El ARN viral es detectable en unas 4-5 horas mediante la técnica RT- PCR . Señala la infección viral actual. En la saliva o la nasofaringe, está presente durante las fases invasiva y eruptiva. La detección en la sangre (viremia) es temprana y transitoria. La presencia del virus en la orina puede prolongarse unos días.
• El aislamiento del virus en cultivo requiere al menos una semana de cultivo.
• Los anticuerpos contra el virus del sarampión se pueden analizar en ELISA en aproximadamente 2 horas. La presencia de anticuerpos IgM e IgG indica infección (aparte de la reciente vacunación contra el sarampión). Los anticuerpos IgM e IgG aparecen con la erupción; IgM persiste durante unos 2 meses, y IgG durante mucho tiempo...
• CNR durante más de 72 horas a temperatura ambiente puede provocar que las pruebas de detección de ARN, virus o anticuerpos IgM sean falsamente negativas.

Los resultados de los exámenes realizados en el CNR se transmiten inmediatamente al médico prescriptor o biólogo, quien, en el marco de la DO, debe transmitirlos a la ARS local

Para todos los virus ( RSV , hMPV, hPIV, MuV, NDV), la muestra recomendada es una colección de secreciones nasales:

• Se toman mediante un hisopo apoyado en la parte anterior de las fosas nasales o mediante aspiración con bomba. Deben colocarse en un medio específico (medio de transporte virológico) y enviarse al CNR .
•   Se pueden utilizar otras muestras: secreciones traqueobronquiales en pacientes intubados, LCR: paperas.
• infecciones por RSV (no hay viremia y los anticuerpos específicos aparecen tardíamente). Es útil en paperas: detección de IgM e IgG por ELISA en caso de infección primaria.

    Las técnicas utilizadas para la investigación directa:

• La detección de RSV , hMPV y hPIV1,2 y 3 se realiza mediante inmunofluorescencia en un frotis de secreciones nasales.
• El aislamiento viral es posible en células MRC5 para RSV y en ciertas líneas continuas humanas o animales para hPIV, hMPV y MuV. Esta técnica no se recomienda para el diagnóstico.
• La búsqueda de ARN viral se realiza mediante RT- PCR para todos los virus: RSV , hPIV, hMPV, MuV, NDV. RT- PCR en tiempo real o convencional, uni o multiplex

    Tiempos de respuesta, interpretación y transmisión de resultados:

• La prueba de inmunofluorescencia directa proporciona un resultado en unos 60 min. Puede parecer negativo si la muestra se tomó tarde, si contiene pocas células o se transmitió en malas condiciones.
• El ARN viral es detectable en unas 4-5 horas mediante la técnica RT- PCR , y en 24 horas mediante la clásica PCR Señala la infección viral actual. Para todos los virus, siempre está presente durante la fase aguda de la enfermedad y puede persistir durante varios días después de la recuperación.

Los resultados de los exámenes realizados en el CNR se envían directamente al médico o biólogo prescriptor.

• El CNR contribuye al conocimiento de la seroprevalencia y el nivel de protección de la población frente a los virus sarampión, parotiditis, RSV , hHMPV, hPIV y NDV a través de encuestas serológicas.
• El CNR asegura el rastreo epidemiológico de las infecciones vinculadas a estos diferentes virus que ocurren en las comunidades (identificación del caso índice, epidemias nosocomiales en departamentos hospitalarios, epidemias en comunidades de ancianos, etc.) mediante el uso de herramientas moleculares específicas.
• El CNR recopila y mantiene una biblioteca de cepas que comprende cepas de referencia, cepas representativas de sucesivas epidemias y cepas aisladas de patologías graves o específicas.

• El CNR mantiene y distribuye material biológico de referencia: cepas virales, líneas celulares, controles positivos de ARN.
• Invierte en el desarrollo, evaluación y difusión de técnicas de diagnóstico, comerciales o académicas.
• Participa en la docencia universitaria y hospitalaria sobre los virus del sarampión, paperas, RSV , hMPV y hPIV.
• Contribuye a la formación de biólogos extranjeros acogiéndolos para pasantías o involucrando la transferencia de tecnologías.

El CNR es uno de los laboratorios europeos acreditados para el diagnóstico del sarampión “Euro Measles/Rubéola Laboratory Network”, por la OMS .

El CNR ha establecido una colaboración regular con tres estructuras:

• InVS : envío bimensual de información epidemiológica: número de cepas, genotipos.
• “Laboratorio Regional Europeo de Referencia para el Sarampión y la Rubéola” , en el Instituto de Inmunología (Luxemburgo): envío de secuencias virales para comparación con otros genotipos europeos.
• “Oficina Regional de la OMS para Europa, Unidad de Enfermedades Transmisibles” en Copenhague: envío de información epidemiológica.

El CNR , ubicado en el Laboratorio de Virología Humana y Molecular del Hospital Universitario de Caen Normandía, está abierto de lunes a viernes de 8 a 17 horas Las muestras se pueden recibir los sábados por la mañana de 8:00 a. m. a 12:00 p. m.

Las búsquedas de ARN viral se realizan todos los días hábiles.

La hoja que acompañe a la muestra deberá incluir, además de los datos administrativos (apellidos, nombre, edad, sexo, etc.) , los siguientes datos:

• el nombre, dirección, número de teléfono y correo electrónico del médico que prescribe,
• la fecha del inicio de la erupción y la fecha de la muestra de saliva,
• una valoración global de la intensidad de la enfermedad: sarampión típico, sarampión atenuado, sarampión complicado,
• el terreno frágil: lactantes, mujeres embarazadas, inmunocomprometidos,
• la noción de una vacunación en la infancia (1 o 2 dosis) o reciente (1 a 4 semanas), o un viaje reciente,
• la existencia o no de casos agrupados y/o contacto identificado,
• el resultado se puede esperar dentro de 24-48h. siguiente a la recepción de la muestra. Se envía inmediatamente por fax o correo electrónico al médico prescriptor o al laboratorio. Un envío postal, que incluye el genotipo viral en caso de una búsqueda de ARN positiva, sigue unos días después,
• la identificación del genotipo viral por secuenciación se realiza dos veces por semana.