فيروس الحصبة والحصبة الألمانية والنكاف CNR

المراكز المرجعية الوطنية هي متخصصة في علم الأحياء الدقيقة للأمراض المعدية . يتم تعيينها بموجب مرسوم من وزارة الصحة لمدة أربع سنوات. ويخضع تجديدها لتقييم من قبل المرجعية الوطنية تحت مسؤولية المدير العام للمعهد الفرنسي لمراقبة الصحة العامة (InVS ) .

وهي مسؤولة، بالتعاون الوثيق مع الصحة العامة الفرنسية (SpF)، عن المساهمة في تشخيص ومراقبة الأوبئة للعدوى البشرية التي يسببها فيروس الحصبة (فيروس الحصبة، MeV)، والفيروس التنفسي المخلوي البشري (hRSV، RSV )، وفيروس الميتابنوموفيروس البشري (hMPV)، وفيروسات نظير الإنفلونزا البشرية الأربعة (hPIV) وفيروس النكاف (MuV، فيروس النكاف).

يُصاحب التشخيص الفيروسي للحصبة عادةً عملية الإبلاغ الإلزامي عن الحصبة. ويعتمد هذا التشخيص إما على التشخيص المباشر: الكشف عن الفيروس أو مكوناته (الحمض النووي الريبي، والمستضدات)، أو على الكشف عن الأجسام المضادة: التشخيص غير المباشر أو التشخيص المصلي.

العينات:

• يقوم الطبيب بجمع عينة اللعاب باستخدام مجموعة أدوات جمع اللعاب التي توفرها أنبوب جمع اللعاب)، وحاوية النقل (صندوق ومظروف)، ومعلومات التعريف السريري. تسمح هذه العينة بالكشف عن الحمض النووي الريبي الفيروسي والأجسام المضادة للفيروسات في حال كانت نتيجة الحمض النووي الريبي سلبية. ثم تُرسل العينة بالبريد إلى المركز .
• في بيئة المستشفى، يُنصح بأخذ مسحة أنفية أو بلعومية أنفية على وسط نقل فيروسي. وهذا يسمح بالكشف عن الحمض النووي الريبي الفيروسي.
• يُستخدم فحص الدم في أغلب الأحيان للكشف عن الأجسام المضادة لفيروس الحصبة (الفحص المصلي). وهذا هو النهج الموصى به حاليًا في طب المجتمع (انظر ورقة التوصيات). تُجمع عينة الدم المحيطي في أنبوب جاف. ولا داعي لذلك إذا سبق أخذ عينة من اللعاب. ويمكن الكشف عن وجود الفيروس في الدم (تجرثم الدم) باستخدام أنبوب دم يحتوي على مادة EDTA.
• في بعض الحالات المعقدة، تكون عينات أخرى مفيدة: إفرازات القصبة الهوائية، والبول، والسائل النخاعي الشوكي..

التقنيات:

• تعتمد التقنية الأساسية المستخدمة للكشف عن الفيروسات على البحث عن الحمض النووي الريبي الفيروسي باستخدام تقنية جزيئية تُعرف باسم تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي في الوقت الحقيقي (RT- PCR ). وفي حال الكشف عن الفيروس، يتم تحديد النمط الجيني للفيروس عن طريق تسلسل جزء من جينومه.
• يتم عزل سلالات فيروس الحصبة في المركز الوطني للبحوث على مزارع خلايا فيرو سلام. ويُستخدم هذا الإجراء لدراسة سلالات فيروسية معينة.
• يُجرى الكشف عن الأجسام المضادة لفيروس الحصبة، من فئتي IgG وIgM، بشكل روتيني باستخدام فحوصات الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) التجارية. ويمكن الكشف عن الأجسام المضادة المُعادلة في مزارع الخلايا (الأجسام المضادة الواقية)، إلا أن ذلك أكثر تعقيدًا. وعند تجاوز مستوى معين، ترتبط مستويات هذه الأجسام المضادة بمستويات الأجسام المضادة التي يتم الكشف عنها بواسطة فحص ELISA.

أوقات الاستجابة والتفسير والإرسال للنتائج:

• يمكن الكشف عن الحمض النووي الريبي الفيروسي في غضون 4-5 ساعات تقريبًا باستخدام تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT- PCR )، مما يدل على وجود عدوى فيروسية نشطة. يتواجد الفيروس في اللعاب أو البلعوم الأنفي خلال مرحلتي الغزو والطفح الجلدي. أما الكشف عنه في الدم (وجود الفيروس في الدم) فهو مبكر وعابر. وقد يستمر وجود الفيروس في البول لبضعة أيام.
• يتطلب عزل الفيروس في المزرعة فترة لا تقل عن أسبوع واحد من الزراعة.
• يمكن قياس الأجسام المضادة لفيروس الحصبة بواسطة اختبار ELISA في غضون ساعتين تقريبًا. يشير وجود الأجسام المضادة من نوع IgM وIgG إلى الإصابة (باستثناء حالات التطعيم ضد الحصبة مؤخرًا). تظهر الأجسام المضادة من نوع IgM وIgG مع الطفح الجلدي؛ وتستمر الأجسام المضادة من نوع IgM لمدة شهرين تقريبًا، بينما تستمر الأجسام المضادة من نوع IgG لفترة أطول بكثير
• إن أي نقل للعينات إلى المركز الوطني للبحوث قد يتسبب في نتائج سلبية خاطئة في اختبارات الكشف عن الحمض النووي الريبي أو الفيروس أو الأجسام المضادة من نوع IgM.

نتائج الاختبارات التي أجريت في المركز الوطني للبحوث فورًا إلى الطبيب أو عالم الأحياء الذي وصف الدواء، والذي يجب عليه، في إطار قانون التشخيص، إرسالها إلى مكتب البحوث الصحية المحلي

بالنسبة لجميع الفيروسات ( RSV ، hMPV، hPIV، MuV، NDV)، فإن العينة الموصى بها هي مجموعة من الإفرازات الأنفية:

• تُجمع العينات عن طريق مسح الجزء الأمامي من تجاويف الأنف بمسحة قوية أو عن طريق الشفط باستخدام مضخة. يجب وضعها في وسط خاص (وسط نقل فيروسي) وإرسالها إلى المركز الوطني للبحوث .
•   يمكن استخدام عينات أخرى: إفرازات القصبة الهوائية في المرضى الذين تم إدخال أنبوب التنفس لهم، السائل النخاعي الشوكي: النكاف.
• حالات العدوى بفيروسات RSV (إذ لا يوجد وجود للفيروس في الدم، وتظهر الأجسام المضادة النوعية بعد فترة). لكن يُفيد أخذ عينة دم في حالات النكاف: حيث يتم الكشف عن الأجسام المضادة من نوع IgM وIgG بواسطة اختبار ELISA في حالات العدوى الأولية.

    التقنيات المستخدمة في البحث المباشر:

• الكشف عن RSV و hMPV و hPIV1 و2 و3 عن طريق التألق المناعي على مسحة من الإفرازات الأنفية.
• يمكن عزل الفيروس على خلايا MRC5 لفيروس RSV ، وعلى بعض خطوط الخلايا البشرية أو الحيوانية المستمرة لفيروسات hPIV وhMPV وMuV. ولا يُنصح باستخدام هذه التقنية للتشخيص.
• يتم الكشف عن الحمض النووي الريبي الفيروسي بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT- PCR) لجميع الفيروسات: (RSV )، وفيروس نظير الإنفلونزا البشري (hPIV)، وفيروس الميتابنومو البشري (hMPV)، وفيروس النكاف (MuV)، وفيروس نيوكاسل (NDV). وبحسب الحالة، تكون هذه الاختبارات فورية أو تقليدية

    أوقات الاستجابة والتفسير والإرسال للنتائج:

• يُعطي اختبار التألق المناعي المباشر نتيجةً في غضون 60 دقيقة تقريبًا. وقد تظهر النتيجة سلبية إذا تم أخذ العينة متأخرًا، أو إذا كانت تحتوي على عدد قليل من الخلايا، أو إذا تم نقلها في ظروف غير مناسبة.
• يمكن الكشف عن الحمض النووي الريبي الفيروسي في غضون 4-5 ساعات تقريبًا باستخدام تقنية تفاعل البوليميراز )، وفي غضون 24 ساعة باستخدام تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي التقليدية. ويشير ذلك إلى وجود عدوى فيروسية نشطة. وبالنسبة لجميع الفيروسات، يكون الحمض النووي الريبي الفيروسي موجودًا دائمًا خلال المرحلة الحادة من المرض، وقد يستمر لعدة أيام بعد الشفاء.

نتائج الاختبارات التي أجريت في المركز الوطني مباشرة إلى الطبيب المعالج أو عالم الأحياء.

• المركز الوطني للبحوث وفيروس الجهاز التنفسي المخلوي وفيروسات وفيروسات من خلال المسوحات المصلية.
• المركز الوطني للبحوث التتبع الوبائي للعدوى المرتبطة بهذه الفيروسات المختلفة التي تحدث في المجتمعات (تحديد الحالة المؤشرة، والأوبئة المكتسبة في المستشفيات، والأوبئة في مجتمعات كبار السن، وما إلى ذلك) من خلال استخدام أدوات جزيئية محددة.
• المركز الوطني للبحوث بإنشاء وصيانة مكتبة للسلالات تشمل السلالات المرجعية، والسلالات التي تمثل الأوبئة المتعاقبة، والسلالات المعزولة من الأمراض الخطيرة أو الخاصة.

• المركز الوطني للبحوث صيانة ونشر المواد البيولوجية المرجعية: السلالات الفيروسية، وخطوط الخلايا، وضوابط الحمض النووي الريبي الإيجابية.
• وهو يشارك في تطوير وتقييم ونشر تقنيات التشخيص، سواء التجارية أو الأكاديمية.
• يشارك في التدريس الجامعي والمستشفيات حول فيروسات الحصبة والنكاف والفيروس المخلوي التنفسي والفيروس البشري الميتابنوموي والفيروس البشري المسبب لفيروسات نظير الإنفلونزا.
• يساهم ذلك في تدريب علماء الأحياء الأجانب من خلال استضافتهم للتدريب الداخلي أو من خلال ربطهم بنقل التقنيات.

المركز الوطني للبحوث جزءًا من المختبرات الأوروبية المعتمدة لتشخيص الحصبة "شبكة مختبرات الحصبة/الحصبة الألمانية الأوروبية"، من قبل منظمة الصحة العالمية .

أقامت الهيئة الوطنية للبحوث تعاوناً منتظماً مع ثلاث منظمات :

• InVS : إرسال المعلومات الوبائية كل شهرين: عدد السلالات، والأنماط الجينية.
• "المختبر المرجعي الإقليمي الأوروبي للحصبة والحصبة الألمانية" ، في معهد علم المناعة (لوكسمبورغ): إرسال التسلسلات الفيروسية للمقارنة مع الأنماط الجينية الأوروبية الأخرى.
• "المكتب الإقليمي لمنظمة الصحة العالمية لأوروبا، وحدة الأمراض المعدية" في كوبنهاغن: إرسال المعلومات الوبائية.

المركز الوطني المرجعي (CNR) ، الموجود في مختبر علم الفيروسات البشرية والجزيئية التابع لمستشفى جامعة كاين نورماندي، أبوابه من الاثنين إلى الجمعة من الساعة 8 صباحًا حتى 5 مساءً. ويمكن استقبال العينات صباح يوم السبت من الساعة 8 صباحًا حتى 12 ظهرًا.

يتم اختبار الحمض النووي الريبي الفيروسي كل يوم عمل.

ورقة المعلومات المرفقة بالعينة ، بالإضافة إلى المعلومات الإدارية (اللقب، الاسم الأول، العمر، الجنس، إلخ) ، المعلومات التالية:

• اسم الطبيب الذي وصف الدواء وعنوانه ورقم هاتفه وعنوان بريده الإلكتروني،
• تاريخ بدء ظهور الطفح الجلدي وتاريخ أخذ عينة اللعاب،
• تقييم شامل لشدة المرض: الحصبة النموذجية، الحصبة الخفيفة، الحصبة المعقدة،
• الفئات السكانية الأكثر عرضة للخطر: الرضع، والنساء الحوامل، والأفراد الذين يعانون من نقص المناعة،
• مفهوم التطعيم في مرحلة الطفولة (جرعة واحدة أو جرعتين) أو التطعيم الحديث (من أسبوع إلى أربعة أسابيع)، أو السفر الحديث،
• وجود أو عدم وجود حالات متجمعة و/أو جهة اتصال محددة،
• يمكن توقع ظهور النتيجة خلال 24-48 ساعة من استلام العينة. تُرسل النتيجة فورًا عبر الفاكس أو البريد الإلكتروني إلى الطبيب المعالج أو المختبر. ويتبع ذلك شحنة بريدية، تتضمن النمط الجيني للفيروس في حالة نتيجة اختبار الحمض النووي الريبي الإيجابية، بعد بضعة أيام
• يتم تحديد النمط الجيني للفيروس عن طريق التسلسل مرتين في الأسبوع.