Masern-, Röteln- und Mumpsvirus CNR

Die Nationalen Referenzzentren ( CNR ) sind Expertenlabore für die Mikrobiologie übertragbarer Krankheiten . Sie werden auf Anordnung des für Gesundheit zuständigen Ministeriums für die Dauer von vier Jahren ernannt. CNR- Ausschuss , der unter der Verantwortung des Generaldirektors des Instituts für Gesundheitsüberwachung steht.

Es ist in enger Zusammenarbeit mit Public Health France (SpF) dafür verantwortlich, zur Diagnose und epidemiologischen Überwachung menschlicher Infektionen beizutragen, die durch das Masernvirus (Masernvirus, MeV, Masernvirus) und das Human Respiratory Syncytial Virus (hRSV, RSV ) , Humanes Metapneumovirus (hMPV), die 4 Humanen Parainfluenzaviren (hPIV) und Mumpsvirus (MuV, Mumpsvirus).

Die virologische Diagnose von Masern geht in der Regel mit dem „DO“-Verfahren (Mandatory Measles Declaration) einher. Sie basiert entweder auf einer direkten Diagnose: Suche nach dem Virus oder seinen Bestandteilen (RNA, Antigene) oder auf der Suche nach Antikörpern: indirekte Diagnose oder Serodiagnose.

Abhebungen :

• Die Speichelprobe erfolgt durch den Arzt mithilfe eines von der ARS , einschließlich der Entnahmesysteme („Salivette“), des Transports (Box und Umschlag) und der Informationen (klinische Identität). Die Probe ermöglicht die Suche nach dem viralen RNA-Genom und Antivirus-Antikörpern im Falle negativer RNA. Der Versand erfolgt per Post an das CNR .
• Im Krankenhausbereich wird eine nasale oder nasopharyngeale Probe auf einem virologischen Transportmedium empfohlen. Es ermöglicht die Suche nach viraler RNA.
• Die Blutprobe dient meist der Suche nach Anti-Masern-Virus-Antikörpern (Serologie). Dies ist heute der empfohlene Ansatz in der Gemeinschaftsmedizin (siehe Blatt „Empfehlungen“). Die periphere Blutprobe wird aus einem trockenen Röhrchen entnommen. Es ist nicht notwendig, wenn eine Speichelprobe entnommen wurde. Das Vorhandensein des Virus im Blut (Virämie) kann mit einem EDTA-Blutröhrchen getestet werden.
• Bei bestimmten Komplikationen sind andere Proben nützlich: tracheobronchiale Sekrete, Urin, Liquor usw.

Die Techniken:

• Die grundlegende Technik zum Nachweis des Virus ist die Suche nach der viralen RNA durch eine molekulare Technik: RT- PCR (reverse Transkription, Polymerase-Kettenreaktion) in Echtzeit. Im Falle eines positiven Nachweises erfolgt die Identifizierung des viralen Genotyps durch Sequenzierung eines Teils des viralen Genoms.
• Die Isolierung von Masernvirusstämmen erfolgt am CNR auf Vero-Slam-Zellkulturen. Es ist für die Untersuchung bestimmter Virusstämme geeignet.
• Der Nachweis von Anti-Masern-Virus-Antikörpern der IgG- und IgM-Klassen erfolgt routinemäßig mit kommerziellen immunoenzymatischen Kits (ELISA). Die Suche nach neutralisierenden Antikörpern in der Zellkultur (Schutzantikörper) ist möglich, aber aufwändiger. Ab einem bestimmten Wert korrelieren sie mit den im ELISA nachgewiesenen Antikörperspiegeln.

Reaktionszeiten, Interpretation und Übermittlung der Ergebnisse:

• PCR- in etwa 4–5 Stunden nachweisbar . Es deutet auf eine aktuelle Virusinfektion hin. Im Speichel oder im Nasopharynx kommt es während der invasiven und eruptiven Phase vor. Der Nachweis im Blut (Virämie) erfolgt früh und vorübergehend. Das Vorhandensein des Virus im Urin kann einige Tage anhalten.
• Die Isolierung des Virus in Kultur erfordert eine mindestens einwöchige Kultur.
• Anti-Masern-Virus-Antikörper können im ELISA in etwa 2 Stunden bestimmt werden. Das Vorhandensein von IgM- und IgG-Antikörpern weist auf eine Infektion hin (außer bei einer kürzlich erfolgten Masernimpfung). IgM- und IgG-Antikörper treten zusammen mit dem Ausschlag auf; IgM bleibt etwa 2 Monate bestehen, IgG sehr lange …
• CNR über mehr als 72 Stunden bei Raumtemperatur kann dazu führen, dass die Nachweistests auf RNA, Viren oder IgM-Antikörper falsch negativ ausfallen.

Die Ergebnisse der im CNR werden unverzüglich an den verschreibenden Arzt oder Biologen übermittelt, der sie im Rahmen der DO an die örtliche ARS

Für alle Viren ( RSV , hMPV, hPIV, MuV, NDV) ist die empfohlene Probe eine Sammlung von Nasensekret:

• Die Entnahme erfolgt durch einen Abstrichtupfer aus dem vorderen Teil der Nasenhöhle oder durch Absaugen mit einer Pumpe. Sie müssen in ein bestimmtes Medium (virologisches Transportmedium) gegeben und an das CNR .
•   Weitere Proben können verwendet werden: tracheobronchiale Sekrete bei intubierten Patienten, Liquor: Mumps.
• RSV- Infektionen (es liegt keine Virämie vor und spezifische Antikörper erscheinen verzögert). Bei Mumps ist es nützlich: Nachweis von IgM und IgG durch ELISA im Falle einer Primärinfektion.

    Die für die direkte Forschung verwendeten Techniken:

• Der Nachweis der RSV , hMPV und hPIV1,2 und 3 erfolgt mittels Immunfluoreszenz an einem Ausstrich von Nasensekret.
• Eine Virusisolierung ist für RSV und für hPIV, hMPV und MuV auf bestimmten kontinuierlichen menschlichen oder tierischen Linien möglich. Diese Technik wird für die Diagnose nicht empfohlen.
• Die Suche nach viraler RNA erfolgt mittels RT- PCR für alle Viren: RSV , hPIV, hMPV, MuV, NDV. um Echtzeit- oder konventionelle, Uni- oder Multiplex -RT- PCR

    Reaktionszeiten, Interpretation und Übermittlung der Ergebnisse:

• Der direkte Immunfluoreszenztest liefert ein Ergebnis in etwa 60 Minuten. Es kann negativ erscheinen, wenn die Probe zu spät entnommen wurde, nur wenige Zellen enthält oder unter schlechten Bedingungen übertragen wurde.
• PCR- und mit der klassischen PCR- nachweisbar Es deutet auf eine aktuelle Virusinfektion hin. Bei allen Viren ist es während der akuten Phase der Erkrankung immer vorhanden und kann nach der Genesung noch mehrere Tage bestehen bleiben.

CNR durchgeführten Untersuchungen werden direkt an den verschreibenden Arzt oder Biologen übermittelt.

• Das CNR trägt durch serologische Untersuchungen zur Kenntnis der Seroprävalenz und des Schutzniveaus der Bevölkerung vor Masern-, Mumps-, RSV- , hHMPV-, hPIV- und NDV-Viren bei.
• Das CNR gewährleistet die epidemiologische Verfolgung von Infektionen im Zusammenhang mit diesen verschiedenen Viren, die in Gemeinschaften auftreten (Identifizierung des Indexfalls, nosokomiale Epidemien in Krankenhausabteilungen, Epidemien in Gemeinschaften älterer Menschen usw.) durch den Einsatz spezifischer molekularer Instrumente.
• Das CNR erstellt und pflegt eine Stammbibliothek mit Referenzstämmen, Stämmen, die für aufeinanderfolgende Epidemien repräsentativ sind, und Stämmen, die aus schwerwiegenden oder spezifischen Pathologien isoliert wurden.

• Das CNR pflegt und vertreibt biologisches Referenzmaterial: Virusstämme, Zelllinien, positive RNA-Kontrollen.
• Es investiert in die Entwicklung, Bewertung und Verbreitung von Diagnosetechniken, ob kommerziell oder akademisch.
• Er nimmt an Universitäts- und Krankenhauslehrveranstaltungen zu Masern-, Mumps-, RSV- , hMPV- und hPIV-Viren teil.
• Es trägt zur Ausbildung ausländischer Biologen bei, indem es diese zu Praktika aufnimmt oder sich in den Technologietransfer einbringt.

Das CNR ist eines der von der WHO .

Das CNR hat eine regelmäßige Zusammenarbeit mit drei Strukturen aufgebaut:

• InVS : Zweimonatliche Übermittlung epidemiologischer Informationen: Anzahl der Stämme, Genotypen.
• „Europäisches regionales Referenzlabor für Masern und Röteln“ am Institut für Immunologie (Luxemburg): Senden von Virussequenzen zum Vergleich mit anderen europäischen Genotypen.
• „WHO-Regionalbüro für Europa, Abteilung für übertragbare Krankheiten“ in Kopenhagen: Übermittlung epidemiologischer Informationen.

Das CNR befindet sich im Labor für Human- und Molekularvirologie des Universitätsklinikums Caen Normandie und ist Montag bis Freitag von 8.00 bis 17.00 Uhr geöffnet . Die Proben können am Samstagmorgen von 8:00 bis 12:00 Uhr entgegengenommen werden.

An jedem Arbeitstag werden virale RNA-Suchen

Das der Probe beiliegende Blatt muss neben den administrativen Angaben (Name, Vorname, Alter, Geschlecht etc.) folgende Angaben enthalten:

• Name, Adresse, Telefonnummer und E-Mail des verschreibenden Arztes,
• das Datum des Ausbruchsbeginns und das Datum der Speichelprobe,
• eine Gesamteinschätzung der Krankheitsintensität: typische Masern, abgeschwächte Masern, komplizierte Masern,
• das fragile Terrain: Säuglinge, schwangere Frauen, immungeschwächte,
• die Vorstellung einer Impfung im Kindesalter (1 oder 2 Dosen) oder kürzlich (1 bis 4 Wochen) oder einer kürzlichen Reise,
• ob es gruppierte Fälle und/oder einen identifizierten Kontakt gibt oder nicht,
• Das Ergebnis ist innerhalb von 24-48 Stunden zu erwarten. nach Erhalt der Probe. Die Übermittlung erfolgt umgehend per Fax oder E-Mail an den verschreibenden Arzt bzw. das Labor. Ein postalischer Versand inklusive viralem Genotyp bei positiver RNA-Suche folgt wenige Tage später,
• Die Identifizierung des viralen Genotyps durch Sequenzierung erfolgt zweimal pro Woche.