Masern-, Röteln- und Mumpsvirus CNR

Nationale Referenzzentren ( NRCs ) sind Expertenlabore für die Mikrobiologie übertragbarer Krankheiten . Sie werden per Dekret des Gesundheitsministeriums für eine Amtszeit von vier Jahren ernannt. Ihre Verlängerung ist abhängig von einer Evaluierung durch einen NRC- unter der Leitung des Generaldirektors des französischen Instituts für die Überwachung der öffentlichen Gesundheit (InVS).

Sie ist in enger Zusammenarbeit mit Public Health France (SpF) für die Diagnose und epidemiologische Überwachung von Infektionen beim Menschen verantwortlich, die durch das Masernvirus (Masernvirus, MeV), das humane respiratorische Synzytialvirus (hRSV, RSV ), das humane Metapneumovirus (hMPV), die vier humanen Parainfluenzaviren (hPIV) und das Mumpsvirus (MuV, Mumpsvirus) verursacht werden.

Die virologische Diagnose von Masern erfolgt in der Regel im Rahmen der Meldepflicht für Masernfälle (DO). Sie beruht entweder auf der direkten Diagnose: dem Nachweis des Virus oder seiner Bestandteile (RNA, Antigene) oder auf dem Nachweis von Antikörpern: der indirekten Diagnose oder Serodiagnostik.

Die Proben:

• Die Speichelprobe wird vom Arzt mithilfe eines von den ARS ) bereitgestellten Speichelprobenentnahmesets entnommen. Dieses Set umfasst das Probenentnahmesystem (Speichelröhrchen), den Transportbehälter (Schachtel und Umschlag) sowie die erforderlichen klinischen Identifikationsdaten. Die Probe ermöglicht den Nachweis des viralen RNA-Genoms und antiviraler Antikörper bei negativem RNA-Befund. Anschließend wird sie per Post an das Nationale Referenzzentrum (CNR) .
• Im Krankenhausumfeld wird ein Nasen- oder Nasenrachenabstrich auf virologischem Transportmedium empfohlen. Dies ermöglicht den Nachweis von viraler RNA.
• Die Blutentnahme dient am häufigsten dem Nachweis von Masernvirus-Antikörpern (Serologie). Dies ist derzeit die empfohlene Vorgehensweise in der Allgemeinmedizin (siehe Empfehlungsblatt). Peripheres Blut wird in einem trockenen Röhrchen entnommen. Dies ist nicht erforderlich, wenn bereits eine Speichelprobe entnommen wurde. Das Vorhandensein des Virus im Blut (Virämie) kann in einem EDTA-Blutröhrchen nachgewiesen werden.
• Bei bestimmten Komplikationen sind auch andere Proben hilfreich: Tracheobronchialsekret, Urin, Liquor…

Die Techniken:

• Die grundlegende Methode zum Virusnachweis ist die Suche nach viraler RNA mittels eines molekularbiologischen Verfahrens: der Echtzeit-RT- PCR (Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion). Bei einem positiven Nachweis wird der virale Genotyp durch Sequenzierung eines Teils des viralen Genoms bestimmt.
• Die Isolierung von Masernvirusstämmen erfolgt am CNR auf Vero-Slam-Zellkulturen. Dieses Verfahren eignet sich zur Untersuchung bestimmter Virusstämme.
• Der Nachweis von Masernvirus-Antikörpern der Klassen IgG und IgM erfolgt routinemäßig mittels kommerzieller Enzymimmunoassays (ELISA). Der Nachweis neutralisierender Antikörper in Zellkulturen (Schutzantikörper) ist zwar möglich, aber komplexer. Ab einem bestimmten Wert korrelieren sie mit den mittels ELISA gemessenen Antikörperspiegeln.

Reaktions-, Auswertungs- und Übermittlungszeiten für Ergebnisse:

• Virale RNA ist mittels RT- PCR . Dies deutet auf eine bestehende Virusinfektion hin. Sie ist während der Invasions- und Ausbruchsphase im Speichel oder Nasenrachenraum nachweisbar. Der Nachweis im Blut (Virämie) erfolgt früh und ist vorübergehend. Das Virus kann im Urin einige Tage lang nachweisbar sein.
• Die Isolierung des Virus in einer Kultur erfordert eine Kultivierungsdauer von mindestens einer Woche.
• Masernvirus-Antikörper lassen sich mittels ELISA innerhalb von etwa 2 Stunden nachweisen. Das Vorhandensein von IgM- und IgG-Antikörpern weist auf eine Infektion hin (außer bei kürzlich erfolgter Masernimpfung). IgM- und IgG-Antikörper treten zusammen mit dem Hautausschlag auf; IgM-Antikörper sind etwa 2 Monate, IgG-Antikörper deutlich länger nachweisbar
• Ein Transport von Proben zum CNR kann zu falsch negativen Ergebnissen bei Tests zum Nachweis von RNA, Viren oder IgM-Antikörpern führen.

Die Ergebnisse der im CNR werden unverzüglich an den verschreibenden Arzt oder Biologen übermittelt, der sie im Rahmen der DO an das örtliche ARS

Für alle Viren ( RSV , hMPV, hPIV, MuV, NDV) wird als Probenmaterial eine Sammlung von Nasensekret empfohlen:

• Die Proben werden durch festes Abstreichen des vorderen Nasenraums oder durch Absaugen mit einer Pumpe gewonnen. Sie müssen in ein spezielles Medium (virologisches Transportmedium) gegeben und an das CNR .
•   Andere Proben können verwendet werden: Tracheobronchialsekret bei intubierten Patienten, Liquor: Mumps.
• RSV- Infektionen (es liegt keine Virämie vor, und spezifische Antikörper treten verzögert auf). Sie ist bei Mumps hilfreich: Nachweis von IgM- und IgG-Antikörpern mittels ELISA bei Primärinfektionen.

    Die für die direkte Suche verwendeten Techniken:

• Der Nachweis von RSV- , hMPV- und hPIV1-,2- und 3-Antigenen erfolgt mittels Immunfluoreszenz an einem Abstrich von Nasensekreten.
• Die Virusisolierung ist auf MRC5-Zellen für RSV und auf bestimmten humanen oder tierischen kontinuierlichen Zelllinien für hPIV, hMPV und MuV möglich. Diese Technik wird für die Diagnostik nicht empfohlen.
• Der Nachweis viraler RNA erfolgt mittels RT- PCR für alle Viren: RSV , hPIV, hMPV, MuV, NDV. Je nach Fall werden Echtzeit- oder konventionelle PCR-Tests

    Reaktions-, Auswertungs- und Übermittlungszeiten für Ergebnisse:

• Der direkte Immunfluoreszenztest liefert ein Ergebnis in etwa 60 Minuten. Er kann negativ ausfallen, wenn die Probe zu spät entnommen wurde, nur wenige Zellen enthält oder unter ungünstigen Bedingungen übertragen wurde.
• PCR nach etwa 4–5 Stunden und mittels konventioneller RT- PCR . Sie weist auf eine bestehende Virusinfektion hin. Bei allen Viren ist sie während der akuten Phase der Erkrankung stets vorhanden und kann auch nach der Genesung noch mehrere Tage nachweisbar sein.

Die Ergebnisse der im CNR werden direkt an den verschreibenden Arzt oder Biologen übermittelt.

• Das CNR RSV- Viren .
• Das CNR gewährleistet die epidemiologische Rückverfolgung von Infektionen, die mit diesen verschiedenen Viren in der Bevölkerung in Zusammenhang stehen (Identifizierung des Indexfalls, nosokomiale Epidemien in Krankenhäusern, Epidemien in Gemeinschaften älterer Menschen usw.) mithilfe spezifischer molekularer Methoden.
• Das CNR erstellt und pflegt eine Stammbibliothek, die Referenzstämme, Stämme, die für aufeinanderfolgende Epidemien repräsentativ sind, und Stämme, die aus schweren oder besonderen Pathologien isoliert wurden, umfasst.

• Das CNR gewährleistet die Erhaltung und Verbreitung von biologischem Referenzmaterial: Virusstämme, Zelllinien, positive RNA-Kontrollen.
• Er ist an der Entwicklung, Bewertung und Verbreitung von Diagnoseverfahren beteiligt, sowohl im kommerziellen als auch im akademischen Bereich.
• Er beteiligt sich an der Lehre an Universitäten und Krankenhäusern zu Masern, Mumps, RSV , hMPV und hPIV Viren.
• Es leistet einen Beitrag zur Ausbildung ausländischer Biologen, indem es ihnen Praktika ermöglicht oder sie in den Technologietransfer einbindet.

Das CNR WHO für die Diagnose von Masern akkreditierten europäischen Labornetzwerks „Euro Masern/Röteln“ .

Das CNR unterhält eine regelmäßige Zusammenarbeit mit drei Organisationen:

• InVS : Zweimonatliche Übermittlung epidemiologischer Informationen: Anzahl der Stämme, Genotypen.
• „Europäisches regionales Referenzlabor für Masern und Röteln“ am Institut für Immunologie (Luxemburg): Einsendung von Virussequenzen zum Vergleich mit anderen europäischen Genotypen.
• „Regionalbüro der WHO für Europa, Abteilung für übertragbare Krankheiten“ in Kopenhagen: Übermittlung epidemiologischer Informationen.

Das Nationale Referenzzentrum (CNR) im Labor für Human- und Molekularvirologie des Universitätsklinikums Caen Normandie ist von Montag bis Freitag von 8:00 bis 17:00 Uhr geöffnet. Proben können samstagmorgens von 8:00 bis 12:00 Uhr entgegengenommen werden.

Virus-RNA-Tests werden an jedem Werktag durchgeführt.

Das dem Muster beigefügte Informationsblatt muss neben administrativen Angaben (Nachname, Vorname, Alter, Geschlecht usw.) folgende Informationen enthalten:

• Name, Anschrift, Telefonnummer und E-Mail-Adresse des verschreibenden Arztes,
• das Datum, an dem der Ausschlag begann, und das Datum, an dem die Speichelprobe entnommen wurde,
• eine Gesamtbeurteilung des Schweregrades der Erkrankung: typische Masern, leichte Masern, komplizierte Masern,
• Die besonders gefährdeten Bevölkerungsgruppen: Säuglinge, Schwangere, immungeschwächte Personen,
• die Vorstellung einer Impfung im Kindesalter (1 oder 2 Dosen) oder einer kürzlich erfolgten Impfung (1 bis 4 Wochen) oder einer kürzlichen Reise,
• das Vorhandensein oder Nichtvorhandensein von gehäuften Fällen und/oder eines identifizierten Kontakts,
• Das Ergebnis liegt voraussichtlich innerhalb von 24 bis 48 Stunden nach Probeneingang vor. Es wird umgehend per Fax oder E-Mail an den behandelnden Arzt oder das Labor übermittelt. Einige Tage später erfolgt der Postversand, der im Falle eines positiven RNA-Tests auch den Virusgenotyp enthält
• Die Identifizierung des viralen Genotyps durch Sequenzierung wird zweimal wöchentlich durchgeführt.