فيروس الحصبة والحصبة الألمانية والنكاف CNR

المراكز المرجعية الوطنية ( CNR ) هي مختبرات متخصصة في علم الأحياء الدقيقة للأمراض المعدية . يتم تعيينهم بأمر من الوزارة المسؤولة عن الصحة لمدة 4 سنوات. لجنة CNR الموضوعة تحت مسؤولية المدير العام لمعهد المراقبة الصحية.

وهي مسؤولة، بالتعاون الوثيق مع الصحة العامة الفرنسية (SpF)، عن المساهمة في التشخيص والمراقبة الوبائية للعدوى البشرية الناجمة عن فيروس الحصبة (فيروس الحصبة، MeV، الفيروس الحصبي)، والفيروس المخلوي التنفسي البشري (hRSV). ، RSV )، والفيروس الرئوي التالي البشري (hMPV)، وفيروسات نظير الأنفلونزا البشرية الأربعة (hPIV) وفيروس النكاف (MuV، فيروس النكاف).

عادةً ما يصاحب التشخيص الفيروسي للحصبة عملية "DO" (إعلان الحصبة الإلزامي). ويعتمد إما على التشخيص المباشر: البحث عن الفيروس أو مكوناته (RNA، المستضدات)، أو على البحث عن الأجسام المضادة: التشخيص غير المباشر أو التشخيص المصلي.

الانسحابات:

• يتم أخذ عينة اللعاب من قبل الطبيب باستخدام مجموعة اللعاب المقدمة من ARS ، بما في ذلك أنظمة الجمع ("اللعاب")، والنقل (الصندوق والمظروف)، والمعلومات (الهوية السريرية). وتتيح العينة البحث عن جينوم الحمض النووي الريبي الفيروسي والأجسام المضادة للفيروس في حالة الحمض النووي الريبي السلبي. يتم إرساله عن طريق البريد إلى CNR .
• في المستشفى ، يوصى بأخذ عينة من الأنف أو البلعوم الأنفي على وسيلة نقل فيروسية. يسمح بالبحث عن الحمض النووي الريبي الفيروسي.
• غالبًا ما تكون عينة الدم مخصصة للبحث عن الأجسام المضادة لفيروس الحصبة (الأمصال). هذا هو النهج الموصى به في طب المجتمع اليوم (راجع ورقة التوصيات). يتم أخذ عينة الدم المحيطي من أنبوب جاف. ليس من الضروري إذا تم أخذ عينة من اللعاب. يمكن اختبار وجود الفيروس في الدم (viremia) على أنبوب الدم EDTA.
• في بعض المضاعفات ، تكون العينات الأخرى مفيدة: إفرازات القصبة الهوائية ، والبول ، والسائل النخاعي ، إلخ.

التقنيات:

• التقنية الأساسية المستخدمة للكشف عن الفيروس هي البحث عن الحمض النووي الريبي الفيروسي بواسطة تقنية جزيئية: RT- PCR (النسخ العكسي ، تفاعل البلمرة المتسلسل) في الوقت الفعلي. في حالة الكشف الإيجابي ، يتم تحديد النمط الجيني الفيروسي عن طريق تسلسل جزء من الجينوم الفيروسي.
• يتم عزل سلالات فيروس الحصبة في CNR في مزارع خلايا Vero Slam. يشار إليه لدراسة سلالات فيروسية معينة.
• يتم إجراء اكتشاف الأجسام المضادة لفيروس الحصبة ، من فئتي IgG و IgM ، بشكل روتيني باستخدام مجموعات الإنزيمات المناعية التجارية (ELISA). إن البحث عن الأجسام المضادة المعادلة في مزرعة الخلايا (الأجسام المضادة الواقية) أمر ممكن ، ولكنه أكثر تعقيدًا. من مستوى معين ، ترتبط بمستويات الأجسام المضادة المكتشفة في ELISA.

أوقات الاستجابة وتفسير ونقل النتائج:

• يمكن اكتشاف الحمض النووي الريبي الفيروسي في حوالي 4-5 ساعات باستخدام تقنية RT- PCR . علامات العدوى الفيروسية الحالية. في اللعاب أو البلعوم الأنفي ، يكون موجودًا خلال المراحل الغازية والانفجارية. الكشف في الدم (viremia) مبكر وعابر. يمكن أن يطول وجود الفيروس في البول لبضعة أيام.
• يتطلب عزل الفيروس في المزرعة أسبوعًا واحدًا على الأقل من الثقافة.
• يمكن فحص الأجسام المضادة لفيروس الحصبة في ELISA في حوالي ساعتين. يشير وجود الأجسام المضادة IgM و IgG إلى وجود عدوى (باستثناء التطعيم الأخير المضاد للحصبة). تظهر الأجسام المضادة IgM و IgG مع الطفح الجلدي. يستمر IgM لمدة شهرين تقريبًا ، و IgG لفترة طويلة جدًا ...
• CNR لأكثر من 72 ساعة في درجة حرارة الغرفة في أن تكون اختبارات الكشف عن RNA أو الفيروس أو الأجسام المضادة IgM سلبية كاذبة.

نتائج الفحوصات التي يتم إجراؤها في CNR على الفور إلى الطبيب المعالج أو عالم الأحياء ، والذي يجب عليه ، في إطار DO ، إرسالها إلى ARS المحلي

بالنسبة لجميع الفيروسات ( RSV ، hMPV ، hPIV ، MuV ، NDV) ، العينة الموصى بها هي مجموعة من إفرازات الأنف:

• يتم أخذها بواسطة مسحة مدعومة من الجزء الأمامي من الحفرة الأنفية أو عن طريق الشفط باستخدام مضخة. يجب وضعها في وسط محدد (وسيلة نقل فيروسية) وإرسالها إلى CNR .
•   يمكن استخدام عينات أخرى: إفرازات القصبة الهوائية في المرضى المنبوبين ، السائل النخاعي: النكاف.
• حالات العدوى بفيروس RSV (لا توجد فيروسية وتظهر الأجسام المضادة المحددة متأخرة). يفيد في حالات النكاف: الكشف عن IgM و IgG بواسطة ELISA في حالة الإصابة الأولية.

    التقنيات المستخدمة في البحث المباشر:

• الكشف عن RSV و hMPV و hPIV1،2 و 3 عن طريق التألق المناعي على مسحة من إفرازات الأنف.
• يمكن عزل الفيروس على خلايا MRC5 من أجل RSV ، وعلى بعض الخطوط البشرية أو الحيوانية المستمرة لفيروس hPIV و hMPV و MuV. لا ينصح بهذه التقنية للتشخيص.
• يتم البحث عن الحمض النووي الريبي الفيروسي بواسطة RT- PCR لجميع الفيروسات: RSV ، hPIV ، hMPV ، MuV ، NDV. في الوقت الفعلي أو التقليدية ، أحادية أو متعددة الإرسال RT- PCR

    أوقات الاستجابة وتفسير ونقل النتائج:

• يوفر اختبار التألق المناعي المباشر نتيجة في حوالي 60 دقيقة. قد يبدو الأمر سلبياً إذا تم أخذ العينة في وقت متأخر ، أو إذا كانت تحتوي على خلايا قليلة ، أو تم نقلها في ظروف سيئة.
• يمكن اكتشاف الحمض النووي الريبي الفيروسي في حوالي 4-5 ساعات بواسطة تقنية RT- PCR ، و 24 ساعة بواسطة PCR الكلاسيكية علامات العدوى الفيروسية الحالية. بالنسبة لجميع الفيروسات ، فهو موجود دائمًا خلال المرحلة الحادة من المرض ويمكن أن يستمر لعدة أيام بعد الشفاء.

نتائج الفحوصات التي يتم إجراؤها في CNR مباشرة إلى الطبيب الذي يصف الطبيب أو عالم الأحياء.

• CNR في معرفة الانتشار المصلي ومستوى حماية السكان ضد فيروسات الحصبة والنكاف وفيروس RSV و hHMPV و hPIV و NDV من خلال المسوحات المصلية.
• CNR التتبع الوبائي للعدوى المرتبطة بهذه الفيروسات المختلفة التي تحدث في المجتمعات (تحديد حالة الفهرس ، أوبئة المستشفيات في أقسام المستشفى ، الأوبئة في مجتمعات المسنين ، إلخ) من خلال استخدام أدوات جزيئية محددة .
• CNR وتحافظ على مكتبة سلالات تضم سلالات مرجعية وسلالات ممثلة للأوبئة المتتالية والسلالات المعزولة من أمراض خطيرة أو محددة .

• CNR على المواد المرجعية البيولوجية ويوزعها: السلالات الفيروسية وخطوط الخلايا وضوابط الحمض النووي الريبي الإيجابية .
• يستثمر في تطوير وتقييم ونشر تقنيات التشخيص ، التجارية أو الأكاديمية.
• يشارك في التدريس في الجامعة والمستشفى حول فيروسات الحصبة والنكاف وفيروس RSV و hMPV و hPIV.
• يساهم في تدريب علماء الأحياء الأجانب من خلال استضافتهم للتدريب أو عن طريق نقل التقنيات.

المركز الوطني للأبحاث أحد المختبرات الأوروبية المعتمدة لتشخيص مرض الحصبة “شبكة مختبرات الحصبة الأوروبية والحصبة الألمانية” من قبل منظمة الصحة العالمية .

أقامت لجنة المصالحة الوطنية تعاونًا منتظمًا مع ثلاثة هياكل :

• InVS : إرسال كل شهرين للمعلومات الوبائية: عدد السلالات والأنماط الجينية.
• "المختبر المرجعي الإقليمي الأوروبي للحصبة والحصبة الألمانية" ، في معهد علم المناعة (لوكسمبورغ): إرسال التسلسلات الفيروسية للمقارنة مع الأنماط الجينية الأوروبية الأخرى.
• "مكتب منظمة الصحة العالمية الإقليمي لأوروبا، وحدة الأمراض السارية" في كوبنهاغن: إرسال المعلومات الوبائية.

CNR في مختبر علم الفيروسات البشرية والجزيئية في مستشفى جامعة كاين نورماندي ، مفتوح من الاثنين إلى الجمعة من الساعة 8 صباحًا حتى الساعة 5 مساءً . يمكن استلام العينات صباح يوم السبت من الساعة 8:00 صباحًا حتى الساعة 12:00 ظهرًا.

يتم عمليات البحث عن الحمض النووي الريبي الفيروسي كل يوم عمل.

الورقة المصاحبة للعينة ، بالإضافة إلى المعلومات الإدارية (اللقب ، والاسم الأول ، والعمر ، والجنس ، وما إلى ذلك) ، المعلومات التالية:

• الاسم والعنوان ورقم الهاتف والبريد الإلكتروني للطبيب الذي يصف الطبيب ،
• تاريخ بدء الثوران وتاريخ عينة اللعاب ،
• تقييم شامل لشدة المرض: الحصبة النموذجية ، الحصبة الموهنة ، الحصبة المعقدة ،
• التضاريس الهشة: الرضع ، النساء الحوامل ، نقص المناعة ،
• فكرة التطعيم في مرحلة الطفولة (جرعة واحدة أو جرعتين) أو حديثًا (من 1 إلى 4 أسابيع) ، أو في رحلة حديثة ،
• وجود أو عدم وجود حالات مجمعة و / أو جهة اتصال محددة ،
• يمكن توقع النتيجة في غضون 24-48 ساعة. بعد استلام العينة. يتم إرساله على الفور عن طريق الفاكس أو البريد الإلكتروني إلى الطبيب المعالج أو المختبر. يتبع إرسال بريدي ، بما في ذلك التركيب الوراثي الفيروسي في حالة البحث الإيجابي عن الحمض النووي الريبي ، بعد بضعة أيام ،
• يتم تحديد التركيب الوراثي الفيروسي عن طريق التسلسل مرتين في الأسبوع.